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血清脂蛋白-α

发布时间:2016-12-22 14:37:27   作者:劲牛股份

脂蛋白α在肝脏合成,是由载脂蛋白A和载脂蛋白B通过二硫键组成的特殊脂蛋白,成分类似低密度脂蛋白。其主要功能是阻止血管内血块溶解,促进动脉粥样硬化形成。脂蛋白α水平持续升高与心绞痛、心肌梗死、脑溢血有密切关系。因为脂蛋白α与高血压、吸烟、高密度脂蛋白胆固醇低密度脂蛋白胆固醇等诸因素无明显相关,所以被视为冠心病的独立危险因子。

血清脂蛋白有三种

(一)高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)

【参考值】

0.94~2.0mmol/L

【临床意义】

降低具有临床意义。HDL-C与TG呈负相关系,见于冠心病、动脉粥样硬化、糖尿病、肝脏损害、肾病综合征。

(二)低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)

【参考值】

沉淀法:2.07~3.12mmol/L,3.15~3.61mmol/L为边缘升高,≥3.64mmol/L为升高。

【临床意义】

升高具有临床意义。LDL-C升高与冠心病发病呈正相关系。

(三)脂蛋白(a),LP(a)

【参考值】 <300mg/L

【临床意义】

脂蛋白(a)升高已作为冠心病及脑血管疾病发病的独立危险因素。

英文名

Lipoprotein-α

 检查

分类

血液生化检查、脂类测定

原理

用聚苯乙烯微量反应板为固相载体,以apo(a)单克隆抗体(McAb)包被,加入待测标本,使其中的apo(a)与圃相化的McAb结合,洗涤除去未结合的标本中其他蛋白质,再加入酶标记的apo(a)McAb,与结合到固相抗体上的apo(a)作用,洗涤除去未结合的酶标记物。加入酶的相应底物产生颜色反应,显色程度决定于结合在固相载体上的apo(a)量。

McAb应用杂交瘤技术制备,以超速离心结合层析法纯化的Lp(a)为抗原。所制备的McAb应与apoB及纤溶酶原(PMG)无交叉反应。混合数株识别apo(a)上不同抗原位点的McAb,用于建立血清Lp(a)双抗体夹心ELISA法。

 试剂

(1)包被缓冲液:0.02mol/L碳酸盐缓冲液,pH9.5。

(2)包被抗体与酶抗体:用McAb混合液,以硫酸铵沉淀法制备抗人apo(a)-IgG,部分作包被用,部分以过碘酸盐法交联辣根过氧化物酶(RZ≥3)得酶标抗体,-20℃保存可稳定数月。

(3)稀释/封闭液:pH7.4缓冲液含磷酸盐0.01mol/L及氯化钠0.15mol/L,临用前取适量缓冲液,加入适量小牛血清及吐温-20。

(4)底物溶液:0.1mol/L柠檬酸及0.2mol/LNa2HPO4缓冲液,pH5.0,临用前每100ml缓冲液中加入邻苯二胺0.1g及30%H2O20.1ml。

(5)终止液:2mol/LH2SO4。

(6)洗涤液:0.15mol/LNaCl,每升含吐温-200.5ml。

(7)参考血清:目前尚无公认的定值血清,可暂用商品(如BM公司产品,1410962)。

 操作方法

(1)包被:聚苯乙烯板,96孔。抗apo(a)-IgG用包被液稀释成10μg/ml浓度,每孔加150μg/ml,4℃过夜。

(2)洗板及封闭:包被后的小孔用洗涤液洗3次,每次5min。每孔中加入封闭液0.15ml,37℃放置30min后,再用洗涤液洗3次。

(3)稀释:参考血清1∶200稀释起,用稀释液倍比稀释8管,作标准曲线用。血清标本可稀释成1∶100或1∶2000后复查。

(4)加样:每孔中加入稀释后的参考血清及标本各100μl,留空白孔只加稀释液,37℃1h可用洗涤液洗3次。

(5)加酶标抗体(稀释度因抗体效价而定,例如1∶20000):每孔100μl,37℃1h。

(6)显色:每孔中加底物溶液100μl,室温(25℃)避光放置15min。

(7)终止反应:每孔中加入终止液50μl。

(8)比色:在酶标比色计上以空白孔校零点比色,波长490nm,读取各孔吸光度(A)。